测定原理

样品通过混合有机溶剂萃取，类胡萝卜素与非类胡萝卜素成分分离，在448nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、烘箱，100目筛、三角瓶或烧杯、漏斗，纱布、玻璃试管、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、正己烷

试剂组成和配制

试剂一：液体100mL×3瓶，4℃保存。

试剂二：液体100mL×1瓶。4℃保存。

试剂三：液体80mL×1瓶。4℃保存。

试剂四：自备。（正己烷）

样本处理

提取：称取0.5g样本，加入1.5mL试剂一 ，冰浴匀浆，超声破萃取15min(可改用振荡金属浴），15000g 25℃离心5min，取上层液转入10mL离心管中，沉淀用1.5mL试剂一重复提取2次，并将上层液并入上述10mL离心管中作为提取出的非皂化类胡萝卜素样品。

皂化：向上述非皂化类胡萝卜素样品中加入2mL试剂二，混匀，25℃室温避光皂化过夜，皂化完成后，加入3mL试剂三，混匀后，5000g 25℃离心5min，将上层类胡萝卜素提取相转入5mL离心管，用正己烷定容到5mL，置冰上待测。

测定操作表

注意：空白管只需测定一次。

计算公式

类胡萝卜素含量（μg/g鲜重）= △A×V样总÷（ε×d）÷W

= 31.25×△A÷W

V样总：提取液总体积，5mL；ε：类胡萝卜素消光系数，0.16；d：比色皿光径，1cm； W：样本质量，g

注意事项

1.提取液易挥发，有毒性，操作时做好防护措施。

2.测定必须能迅速，防止挥发造成误差。