产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
可溶性淀粉合成酶(Soluble starch synthase,SSS)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/48样 | CS-01S63374 |
SSS(EC
测定原理
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:50mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入14mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入8mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入17mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂五:液体×1支,-20℃保存;临用前加入1mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入1mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
粗酶液制备
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
混匀后立即340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。
注意:试剂二如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。
SSS活性计算
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T×稀释倍数
=529×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W)÷T×稀释倍数
=529×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,7.8×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.15 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.9;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
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