产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/48样 | CS-01S63427 |
β-GD广泛存在于动物组织中,是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶,具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。该酶在肝细胞中含量较高。此外在胃癌组织中含量丰富,测定胃液β-GD活性对于研究胃癌具有重要的意义。
测定原理
β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞,通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入5mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体37.5mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:1μmol/mL标准储备液10mL,4℃保存;
样品测定的前处理
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在EP管中加入下列试剂)
注意:标准管和空白管只需测一次。
β-GD活性计算
(1)按样本鲜重计算:
单位定义:每小时每g鲜重样品中催化产生 1μmol酚酞的量为一个活力单位。
β-GD(μmol/h/g 鲜重)= (C标准管×V1)×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=2×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每小时每mg组织蛋白催化产生 1μmol酚酞的量为一个活力单位。
β-GD(μmol/h /mg prot)= (C标准管×V1)×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=2×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
C标准管:标准管浓度, 1μmol/mL;V1:加入样本体积:0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,0.5h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
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