产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
维生素B1(Vitamin B1,VB1)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/48样 | CS-01S63503 |
维生素B1(Vitamin B1)是构成脱羧辅酶的主要成分,参与细胞代谢中的三羧酸循环,是维持机体正常代谢必须的水溶性维生素,在生物体能量代谢中有重要的作用。
测定原理
VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾,亚铁氰化钾与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝,在704nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体35mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体1mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体12mL×1瓶,4℃保存。
试剂五:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。
样本处理
1.组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,13000g离心10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟)。
2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,13000g离心10min,取上清测定。
3.血清:直接测定。
测定操作
计算公式
标准曲线:y = 0.017x+0.0031,R2 = 0.9991;x为标准品浓度:μg/mL;y为△A(A测定管-A空白管)
1. 按照蛋白含量计算
VB1含量(μg/mg prot)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷Cpr
= 58.8×(△A-0.0031)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB1含量(μg/g鲜重)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(W÷V样总)
= 58.8×(△A-0.0031)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB1含量(μg/104 cell)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(细胞数量÷V样总)
= 58.8×(△A-0.0031)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB1含量(μg/mL)=(△A-0.0031)÷ 0.017
= 58.8×(△A-0.0031)
V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意事项
1.若测定结果中吸光值超过1,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2.蛋白浓度较高的样品,比如动物组织,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。
3.显色完成后立即进行测定。
4.标准曲线线性范围为0.1-10μg/mL。
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