产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
多胺氧化酶(Polyamine oxidase,PAO)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/48样 | CS-01S63514 |
多胺氧化酶是催化生物体内多胺氧化的关键酶,通过调节体内多胺水平和生成物的浓度,参与各种植物体对逆境胁迫的反应和生长发育过程。
测定原理:
PAO催化多胺氧化产生过氧化氢,在过氧化氢酶存在的条件下与底物显色,在550nm下有特征吸收峰,通过测定吸光值增加速率来反映PAO活性。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体3mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体3mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3.血清等液体:直接测定。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至550nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
PAO活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.002÷T =0.333×ΔA
(4)按液体体积计算
单位的定义:每mL液体样本在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.002÷T =166.67×ΔA
V反总:反应体系总体积,1×10-3 L;V样:加入样本体积,0.1 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
联系人:高小姐
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