产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
单宁酶(Tannase,TAN)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/24样 | CS-01S63516 |
单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase,EC
测定原理
使用抗氧化剂没食子酸丙酯(PG)作为单宁酶酶促反应的底物,在270nn下测定底物PG反应前后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制
试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1支,4℃保存;临用前每支加入3mL试剂一,充分溶解后备用;用不完的试剂4℃保存;
粗酶液提取
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长到270 nm,蒸馏水调零。
2、加样表
注意:
可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。
TAN活力单位的计算
标准条件下测定回归方程为y = 0.0058x + 0.0044,R2 = 0.9994;x为PG含量(μmol/L),y为吸光值。
1、按样本体积计算
单位的定义:40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少0.01μmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位。
TAN活性(μmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷V样÷T
=34.48×( ΔA-0.0044)
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义:40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少0.01μmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN活性((μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样×Cpr)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044)÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义:40℃下每克样品每分钟水解减少0.01μmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN活性(μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样÷V样总×W)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044)÷W
V反总:反应体系总体积,1mL; V样:加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
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