产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine ammonialyase,PAL)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/48样 | CS-01S63520 |
PAL(EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶,与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。
测定原理
PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值,通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。
所需的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体40mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×3瓶,4℃保存。临用前每瓶加入4mL蒸馏水水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
PAL活性计算
(1)按蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。
PAL(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(Cpr× V样)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。
PAL(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,1.04mL; V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;
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