产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
二氢黄酮醇还原酶(Dihydro flavonol reductase,DFR)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/24样 | CS-01S63510 |
二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶,在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。
测定原理
二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素,可与香草醛缩合形成红色化合物,在500nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品
研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。
试剂组成和配制
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体30mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体3mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加5mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:液体40mL×2瓶,4℃避光保存。
酶液提取
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.液体:直接检测。
测定操作表
酶活性计算公式
标准曲线:y=0.0184x+0.0002,R2=0.999
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在30℃,pH7.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0184×V反总÷(V样×Cpr)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在30℃,pH7.5条件下,每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/g 鲜重)= (△A-0.0002)÷0.0184×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷W
(3)按液体体积计算
酶活性定义:在30℃,pH7.5条件下,每毫升液体每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/mL)=(△A-0.0002)÷0.0184×V反总÷V样÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)
V反总:反应总体积,1mL;V样:反应体系中样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min
联系人:高小姐
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