产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/24样 | CS-01S63546 |
蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC
测定原理
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、离心机、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰
试剂的组成和配制
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存;
试剂二: 液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;临用前每支加入1.2mL试剂二充分溶解待用,现配现用;试剂四:液体6mL×1瓶,4℃保存。
样品测定的准备:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):
SS-Ⅰ活性计算
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0012x - 0.0492;x为标准品浓度(μg/mL),y为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)=[ (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =[(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W
V反总:反应体系总体积,0.1mL; V样:加入样本体积,0.02 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
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