产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
羟自由基清除能力测定试剂盒 | 分光光度法 | 50管/48样 | CS-01S63531 |
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
测定原理
H2O2/ Fe2+ 通过Fenton反应产生羟自由基,将邻二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+ ,导致536nm吸光度下降,样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度,反映了样品清除羟自由基的能力。
自备实验用品
可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体50 mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体16mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体8 mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体16mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体9mL×1瓶,4℃保存。
样品的制备
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.血清、果汁等液体样品可直接测定。
3.提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如5 mg/mL。
操作步骤
1、分光光度计预热30min,调节波长至536nm,蒸馏水调零。
2、工作液配制:使用之前按照每管试剂一:试剂二:试剂三=300:150:300(μL)的比例配制,用多少配多少,混匀。
3、在EP管中加入如下试剂
注意:空白管和对照管只需测定一次。
计算公式
羟自由基清除率 D% =(A测-A对)÷(A空-A对)×100%
A空、A对、A测:空白管、对照管和测定管的吸光值。
注意事项
为了比较不同样品羟自由基清除能力,对于同一批样品必须加入等量的样品,血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。
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