上海莼试生物技术有限公司
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生化检测试剂盒 > 分光检测试剂盒 > L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒
产品名称:
L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒
型号:
CS-01S63533
生产地址
进口、国产
产品价格
电议
产品简介
类黄酮糖基转移酶(UFGT)试剂盒质量可靠、价格优惠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点。
产品详情

一、概述:

 公司上万种科研产品,主要供应各大科研单位和学校,是国内众多科研单位的供应商。公司严把质量关,确保每一个出厂产品质量合格,让您买的省心,用得放心。

产品名称

检测方法

规格

货号

类黄酮糖基转移酶(UFGT)试剂盒

HPLC

50/48

CS-0163533

 注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:

类黄酮是植物次生代谢产物,糖基化是类黄酮基本结构形成的最主要的修饰反应之一,提高了类黄酮苷元的化学稳定性,这一过程主要由类黄酮糖基转移酶催化的,使类黄酮-OHUDPG反应,是黄酮合成途径中的关键酶。

商品介绍:

测定原理

类黄酮糖基转移酶催化花青素与尿苷二磷酸葡萄糖反应产生花青苷,主要以矢车菊素3-葡萄糖苷(C3G)形式存在,用HPLC检测产物可反映类黄酮糖基转移酶的酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、研砵、离心机、恒温水浴锅、100目筛、高校液相色谱、针头过滤器(水系、0.22μm)、滤膜(水系、0.45μm)、耐水C18柱(4.6×250mm)、样品瓶、甲酸、甲醇(色谱级)、超纯水

试剂组成和配制

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加全部试剂三溶解。

试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体8mL×1瓶,4℃保存。

标准品:标准品×1支,-20℃保存。

样本处理

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)12~5的比例(建议称取约0.5g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

实验前的准备工作

1、检测产物制备

2、将500 mL超纯水和500 mL甲醇用0.45 μm的滤膜抽滤,以除去溶剂中的杂质,防止堵塞色谱柱。(注:蒸馏水用水系滤膜抽滤,甲醇用有机系滤膜抽滤)。

3、流动相的配制:流动相A1.6%甲酸水溶液; 流动相B1.6%甲酸甲醇溶液。

4、将配好的流动相超声30分钟,以脱去溶剂中的气泡,防止堵塞色谱柱。

5、标准品的配制:

在标准品中加入1mL甲醇,配成5μmol /mL 母液,将母液用甲醇分别稀释成2μmol/mL 1μmol/mL 0.5μmol/mL 0.25μmol/mL0.125μmol/mL的标准品溶液。针头式过滤器过滤后待测。

测定操作步骤

1. 开启电脑、检测器和泵,安装上色谱柱,打开软件,在方法组中设置进样量10 μL,梯度洗脱为0~5min85%A+15%B; 5~10min85%A+15%B; 10~30min80%A+20%B; 30~30.1min 60%A+40%B; 30.1~40min0%A+100%B。流速1mL/min,柱温30℃,走样时间为50min,检测波长530nm,设置完毕保存方法组。

2.初始设置流动相A=85%,流动相B=15%,流速1 mL/min,待基线稳定后开始加样。

3.加入标准品10 μL,在50min内可分离C3GC3G的保留时间在25min左右,(柱子不同,保留时间有差异),计算不同浓度的C3G标准品的峰面积。

4. 加入样品10 μL,在相应保留时间处检测C3G的峰面积。

酶活计算:

1.以标准品浓度(μmol/mL)为横坐标,峰面积为纵坐标计算C3G标准曲线。将样品峰面积代入标准曲线,计算样品C3G含量。

2.酶活单位定义:

A.每毫克组织蛋白每分钟催化反应产生1μmolC3G定义为一个酶活单位。

UFGT活性(μmol/min/mg prot= C×V反总÷(V样×Cpr)÷ T

=0.117×C÷Cpr

B.每克组织每分钟催化反应产生1μmolC3G定义为一个酶活单位。

UFGT活性(μmol/min/g 鲜重)= C×V反总÷(V样×W÷V样总)÷ T

=0.117×C÷W

CC3G浓度,μmol/mL V反总:反应总体积,0.35mLV样:加入样本量,0.1mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:蛋白含量,mg/mLW:样本质量,gT:反应时间,min

注意事项:

1、流速由小到大调节,避免柱压过大。

2、使用完毕时,先用50%的甲醇水溶液洗色谱柱45min,再用纯甲醇冲洗色谱柱30min

3、标准品的稀释倍数要根据样品中C3G浓度确定,样品中C3G的峰面积必须落在不同浓度的C3G标准品的峰面积之内,该标准品稀释倍数只是一个参考。

注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

标签:类黄酮糖基转移酶(UFGT)试剂盒 

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