产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase, SP)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/48样 | CS-01S63543 |
SP(EC
测定原理
SP能够以磷酸为受体,催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。测定340nm吸光度增加速率,即可计算SP活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体35mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存,临用前加6mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存,临用前加12mL蒸馏水水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
粗酶液提取
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心10min,取上清待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
测定操作表
1.分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2.操作表
SP活性计算公式
1. 按照蛋白浓度计算
酶活定义:37℃,pH6.8时,每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性(nmol/min/mg prot)=×V反总÷V样÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活定义:37℃,pH6.8时,每克样本每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性(nmol/min/g 鲜重)=×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=804×△A÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活定义:37℃,pH6.8时,每104个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性(nmol/min/104 cell)=×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))÷T=804×△A÷细胞数量(万个)
:NADPH摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应体系总体积,1mL;V样:反应体系中样本体积,0.1mL;W:样本质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,2min
注意事项
1.可选用BCA法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。
2.样本较多时,可以按照每个样本试剂一:试剂二:试剂三=600:100:200(μL)的比例配制工作液,用多少配多少,临用前立刻配制,10分钟内使用。
联系人:高小姐
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