ACC在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

测定原理

ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。

需自备的仪器和用品

分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：20mL×1瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂四：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃可保存一周。

试剂五：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃可保存一周。

试剂六：液体 25mL×1 瓶，室温保存。

试剂七：10μmol/mL 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。

样本的前处理

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2、酶促反应试剂的配制和预热：在试剂二瓶中加入6.5mL试剂一，充分溶解混匀；在试剂三瓶中加入5mL蒸馏水，充分溶解混匀；将试剂一、二、三在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。

3、定磷试剂的配制：按H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷试剂

应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

4、0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂七20倍稀释，即取 0.5mL试剂七加9.5蒸馏水，充分混匀。

5、酶促反应

ACC活性计算：

1、按组织蛋白浓度计算：

定义：每小时每毫克组织蛋白产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。

ACC (μmol/h/mg prot)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷

(V样×Cpr)÷T=10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

2、按样本鲜重计算：

定义：每小时每g组织产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。

ACC (μmol/h/g鲜重)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管）÷

(W× V样÷V样总)÷T=10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

3、按细菌或细胞密度计算：

定义：每小时每500万细菌或细胞产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。

ACC (μmol/h/104 cell)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管）÷

(500× V样÷V样总)÷T=0.02×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

C标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V总：酶促反应总体积，0.5mL；V样：加入样本体积，0.05mL ；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。