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生化检测试剂盒 > 微量检测试剂盒 > 谷草转氨酶(GOT)活性测定试剂盒微量法100管/48样
产品名称:
谷草转氨酶(GOT)活性测定试剂盒微量法100管/48样
型号:
CS-01S63571
生产地址
进口、国产
产品价格
电议
产品简介
谷草转氨酶(GOT)活性测定试剂盒质量可靠、价格优惠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点。
产品详情

一、概述:

 公司上万种科研产品,主要供应各大科研单位和学校,是国内众多科研单位的供应商。公司严把质量关,确保每一个出厂产品质量合格,让您买的省心,用得放心。

产品名称

检测方法

规格

货号

谷草转氨酶(GOT)活性测定试剂盒

微量法

100/48

CS-0163571

 注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:

GOT2.6.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT在心肌细胞中含量最高,临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。

商品介绍:

测定原理

GOT催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。

需自备的仪器和用品

可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体2.5 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:液体2.5 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂三:液体25 mL×1瓶,4℃保存;

样品测定的准备

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定操作表

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。

2、在EP管或在96孔板中加入下列试剂

计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.4768x-0.0013   (x为标准品浓度,umol/mLy为ΔA)

2、血清(浆)GOT活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOTnmol/min/mL=(ΔA+0.0013)÷0.4768÷T×103=104.9×(ΔA+0.0013

3、细胞、细菌和组织中GOT活力的计算

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOTnmol/min/mg prot=[(ΔA+0.0013)÷0.4786×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =104.9×(ΔA+0.0013)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOTnmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =104.9×(ΔA+0.0013)÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOTnmol/min/104 cell=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.21×(ΔA+0.0013

V1:加入反应体系中样本体积,0.01mLV2:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,20minCpr:蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细胞或细菌总数,500万;1031umol/mL=103 nmol/mL

b.使用96孔板测定的计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.2384x-0.0013   (x为标准品浓度,umol/mLy为ΔA)

2、血清(浆)GOT活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOTnmol/min/mL=(ΔA+0.0013)÷0.2384÷T×103=209.7×(ΔA+0.0013

3、细胞、细菌和组织中GOT活力的计算

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOTnmol/min/mg prot=[(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =209.7×(ΔA+0.0013)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOTnmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =209.7×(ΔA+0.0013)÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOTnmol/min/104 cell= [(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.419×(ΔA+0.0013

V1:加入反应体系中样本体积,0.01mLV2:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,20 minCpr:蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细胞或细菌总数,500万;1031umol/mL=103 nmol/mL

1、标准曲线线性范围为:0.01 umol/mL -2 umol/mL

2、ΔA线性范围为:0.01 -1

注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

标签:谷草转氨酶(GOT)活性测定试剂盒 

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