上海莼试生物技术有限公司
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PCR试剂 > PCR鉴定试剂盒 > 厚朴LAMP鉴定试剂盒
产品名称:
厚朴LAMP鉴定试剂盒
型号:
CSP915105
生产地址
进口、国产
产品价格
900-3499
产品简介
厚朴LAMP鉴定试剂盒运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
产品详情

一、概述:

产品及特点:
厚朴LAMP鉴定试剂盒是放线菌的一种,常常会在耳部等引起感染,感染具有多发性、复发性等特点,难以完全治愈,对人体健康造成较长时间的损害,因此检测厚朴LAMP鉴定试剂盒具有重要的意义。本试剂盒根据荧光定量PCR 原理开发,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 特异性高,引物是根据厚朴LAMP鉴定试剂盒高度保守区设计,不会扩增其他细菌。
3. 引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。
4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。
5. 一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。
6. 本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。
 
产品名称 厚朴LAMP鉴定试剂盒
英文名称 Cortex magnoliae officinalis
规格 50次
货号 CSP915105
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。

使用方法:
厚朴LAMP鉴定试剂盒一、制备标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(其浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果进行定量分析,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照,6 个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则 6 个标准曲线样品只选一个做(可以选 4 号,其余样品不变)。

数据处理
厚朴LAMP鉴定试剂盒10. 设定 60℃-96℃范围的融解曲线分析,排除假阳性。
11. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
12. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 30。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 25。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 30 则为阴性,如果小于或等于 25 则为阳性。如果在 25-30 之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 30 则为阴性,如果小于 30,则为阳性

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