英文名称:Antigen Retrieval Buffer (50×EDTA Buffer, pH 8.0)
产品规格:100ml
发货周期:1~3天
免疫染色实验,细胞或组织往往需要经多聚甲醛、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构,然而此步操作通常会封闭抗原决定簇,使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应,从而引起染色信号衰减,甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于:1)醛类固定剂导致组织上的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键,从而封闭抗原表位;2)醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联(cross-link),形成醛交联蛋白,导致抗原表位被封闭。因此,需要对固定组织进行抗原修复(antigen retrieval,AR)来逆转被掩盖的抗原表位,使其重新暴露出来,恢复抗原表位-抗体的结合能力,从而改善染色效果。
抗原修复的方法非常多,主要有热诱导的抗原修复(Heat Induced Epitope Retrieval,HIER)和酶诱导的抗原修复(Proteolytic Induced Epitope Retrieval),修复方法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步,抗原修复方法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液,从而达到最佳的修复效果。
本品为EDTA抗原修复缓冲液,pH8.0,是一款非常经典且应用广泛的热修复缓冲液之一,适用于大多数的抗原,经此缓冲液修复后的染色信号明显得以增强。本品特别适合用于石蜡切片,也可用于冰冻切片等其他样本。本品为50×浓缩的EDTA抗原修复液,使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。按照每个片子需10ml抗原修复液的量来计算,约可做500个样品。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)抗原修复通常用于醛类固定的石蜡切片,而冰冻切片由于组织比较脆弱,易在修复过程中被破坏掉,因此比较少进行抗原修复。然而醛类固定的冰冻切片同样会发生蛋白交联而封闭抗原表位,导致染色效果不佳。很多文献资料表明采用适当的方法进行冰冻切片抗原修复,也能显著改善染色效果。特别是当染色效果欠佳的前提下,可考虑进行冰冻切片的抗原修复。
3)修复过程中一定要使用足量的修复液(1×)来完全浸没组织切片。
4)不同pH的修复液对修复效果的影响很明显,归于传统习惯使用柠檬酸钠修复液,pH6.0(SY0763)比较多。目前很多资料表明绝大多数抗原(抗体),使用高pH值(约8.0或9.0)的修复液能得到更好的染色效果。
储存条件:-20℃,有效期一年。