英文名称：

产品规格：250次/500次/2500次

发货周期：1～3天

主要成份：

A 液 50ml

B 液 2.5ml

蛋白标准品 10ml(2mg/ml)

产品描述：应用试管法可以测量 25 管，微孔板法可以测量 250 孔。

产品保存：室温保存，一年内有效。

产品说明：碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为Cu+,Cu+与 BCA 试剂形成紫颜色的络合物，吸光度强度与蛋白浓度成正比。测定其在 562nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

1.准确灵敏，线性范围广，BCA 试剂的蛋白质测定范围是 20－2000μg/ml。

2.快速：45分钟内完成测定。

3.经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。

4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。

5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。

注意事项：

1.低温或长期保存，若发现 BCA 试剂 A或者试剂 B 有沉淀发生。请 37ºC 温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。

2．不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中 5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80 等。(详情见附录)

3 每次测量蛋白浓度均应做标准曲线。

4.当试剂 A和 B 混合时会有浑浊，混匀后就会消失。

5.需准备 37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-595nm 之间，562nm 最佳。酶标仪需与 96 孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

6.使用 BCA 蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。

7.实验操作规范，提高上样量的精确度。

使用方法：

一．配制 BSA 标准品

注：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS 进行稀释。

二.配制 BCA 工作液

A.计算所需要的总 BCA 工作液体积。

总 BCA 工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA 工作液

注意：试管法检测时每个样品加 2.0ml BCA 工作液，微孔板检测每个样品加 200μl BCA 工作液。

B.配制 BCA 工作液：50 体积的BCA 试剂 A 中加入 1 体积的BCA 试剂 B(A:B=50:1)，充分混匀。

注意：BCA 试剂 B 加入 BCA 试剂 A 中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA 工作液装入密封容器内，室温条件 24h 稳定。

三.试管法(样品：BCA 工作液=1:20)

1.各取 100μl 标准品和待测样品加入到反应管中。

2.每管加入 2.0ml BCA 工作液，混匀。37℃孵育30min。

注意：也可室温孵育2h，或者 60℃孵育30min。BCA 检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围