英文名称：

产品规格：1盒

发货周期：1～3天

产品规格：

Bradford 染色液 100ml

BSA 标准品 20ml(2mg/ml)

产品描述：应用试管法可以测量100管，微孔板法可以测量400孔

产品保存：4℃保存，一年有效。

产品说明：Bradford 蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据 Bradford 染液(考马斯亮蓝 G-250 染料)与蛋白结合，使染料的最大吸收峰从 A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比 Lowry 法大约高四倍，最低蛋白检测量可达 1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。

注意事项：

1．各取样操作应准确无误。

2．在100～1500μg/ml的浓度范围线性最佳。

3．加入样品后的试剂，混合均匀后，静置反应，测量过程中切不要再次剧烈晃动。

4．Bradford 染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热 20min。

5．Bradford 染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。

6．每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。

7．Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。(详情见附录)对于含去垢剂的样品，建议使用BCA蛋白定量检测试剂盒。

使用说明：

一、配制 BSA 标准品

标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。

但也可用 0.9%的NaCl或1×PBS 进行稀释。

二、检测方法

A．试管法检测(线性范围：100-1500μg/ml)

1.各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中；

2.加入1ml Bradford 染色液，混匀。室温孵育10min。

3.分光光度计上测定 595nm 处的吸光度，用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。

4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

B．标准微孔板检测(线性范围：100-1500μg/ml)

1.各取 5μl 各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中；

2.每孔加入 250μl Bradford 染色液，振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板，室温孵育10min。

3.酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度，但是相对于595nm，吸光度会存在~10%的损失。

4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

注意：由于酶标板的光径比比色皿短，经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得，因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm，可使用 7-10μl 标准品/待检样本，和 250μlBradford 染色液来进行检测。