荧光染料Hoechst 33342 具有一定的细胞膜透性,能少许进入正常细胞膜,使其染上低蓝色。Hoechst33342 可以用来复染细胞的细胞核。
对于非固定的活细胞来说,hoechst33342 可以起到区别凋亡和正常细胞的作用,因为凋亡细胞的膜通透性增强,因此进入细胞中的Hoechst 33342 比正常细胞的多,荧光强度要比正常细胞中要高,此外,凋亡细胞的染色体DNA 的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA 结合。
对于细胞的称染来说,可以配以适当的0.1% Triton X-100 通透,从而是所有细胞细胞核有效的染上hoechst 染料。
操作注意事项
1. 临用前,计算好用量,以无水DMSO 溶解固体Hoechst33342 至10mg/mL,避光,-20℃保存。临用前,以去适当体积的染料储液以10mM PBS(pH7.2~7.6)稀释10 倍后即可使用,染料采用室温孵育即可。
2. 用Heochst 33342 染料与细胞孵育的时间不宜过长,一般控制在20min 之内为宜。如果太长可引起Heochst 33342 的发射光谱由蓝光向红光的迁移,从而影响结果的判断。
3. 染料有毒,操作时要戴手套。
4. 荧光显微镜观察:Hoechst 33342 用氪激光激发的紫外光,激发波长为352nm,发射波长为400~500nm,产生蓝色荧光。
储存:-20℃,避光,有效期12个月。