DAPI(4,6-Diamidino-2-phenylindole ,4,6-二氨基-2-苯基吲哚)是一种DNA 特异性染料,与DNA产生非嵌入式结合,发出蓝色荧光。该染料对细胞膜有半通透性,可透过正常活细胞产生较弱的蓝色荧光(细胞固定后荧光增强),而凋亡细胞的膜通透性增加,对其摄取能力增强,产生很强蓝光染色。
正常细胞的核形态呈圆形,边缘清晰,染色均匀,而凋亡细胞的细胞核边缘不规则,细胞核染色体浓集,着色较重,并伴有细胞核固缩,核小体碎片增加,因此从荧光强度及核形态均可鉴别出细胞发生凋亡的典型特征。
操作方法(本方法针对贴壁细胞,但不仅限于贴壁细胞)
1. 贴壁培养的细胞爬片弃去培养基,10mM PBS,pH7.4,洗一次;
2. 再滴加入100μL 的DAPI 染液,室温避光染色5-15 min;
3. 弃去染色液,PBS 漂洗一次,
4. 滴加甘油或Buffer A,荧光显微镜以340/380nm 紫外光激发,500×(40×12.5)(最好是100×油镜头)观察、拍照。
储存:2-8℃,避光,有效期6个月。