细胞凋亡时产生最显著的变化是染色体固缩，DNA 裂解使细胞核形态产发生变化。本试剂盒提供的荧光染料Hoechst 33258 是一种无毒、水溶性双苯咪唑类化合物，可作为荧光探针与DNA 分子结合。
在凋亡细胞中，细胞膜对Hoechst 33258 的摄取增高，并且由于染色体高度浓缩，Hoechst 33258 与之结合增强，染色呈强蓝色荧光，而正常细胞只呈微弱荧光，死细胞则不被染色，由此可检测出凋亡。
注意事项
1. 染色时间严格控制，染色过久可导致假阳性。
2. 由于不同细胞对Hoechst 33258 的摄取能力不同，该法不一定适用所有细胞。
操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡；
2. 用冷Buffer A 洗涤细胞二次，离心收集106 细胞于1.5mL 微量离心管中；（贴壁细胞原位固定染色）
3. 加入1mL 的4%甲醛溶液(用户自备)，4℃固定细胞10min；
4. 离心去固定液，用Buffer A 洗两遍；离心后留50～100μL Buffer A 重悬细胞；
5. 取上步骤50～100μL 细胞悬液涂片，自然晾干；
6. 滴加100μL Hoechst 33258 工作液（备注1），室温染色10 min，水冲净晾干；
7. 以紫外光340nm 波长激发，荧光显微镜下观察。
储存：2-8℃，避光，有效期一年。
上海莼试生物技术有限公司
