瑞氏染液主要应用于血液和骨髓涂片染色。
操作步骤
1. (选做)平置血涂片于染色架上,滴加甲醇固定液,室温固定15-30 分钟。
2. 吸去固定液,室温通风晾干。
3. 将试剂一滴加到载玻片上,均匀覆盖住载片上血细胞,染色时间约为1 分钟。等染液有变红的趋势时,迅速滴加两倍试剂一的量的试剂二。继续染色5 到8 分钟。
4. 小股水流洗片,防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。30s 水洗结束后将载片放到阴凉处风干。
5. 显微镜镜检。
染色结果
1. 红细胞呈浅红色,中央稍淡而略有蝶形态。
2. 白细胞系统清晰易分,细胞膜清晰呈紫黑色,细胞核着色呈深浅不同的紫红色,胞浆中各种颗粒区分明显。其中中性粒细胞浆中颗粒呈淡紫红色,嗜酸粒细胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。单核细胞的胞浆呈灰蓝色,胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。
注意事项
1. 推片:取全血3 微升左右置载玻片上,将推玻片保持与载玻片30 度角,置于血滴正前方,稍往后移与血滴接触,即可见血液沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面向前滑动,至血液铺完血膜为止。
2. 涂片时不要太厚也不要太薄,太厚红细胞重叠并易皱,太薄时不易找到白细胞。
3. 用蜡笔在血膜两头划线,平放于染色架上。血膜要干透后才能染色,否则染色时血膜易脱落。
4. 试剂一及二染液不能过少,以防很快蒸发引起染液沉淀。试剂一不可少于400 微升,试剂二是试剂一的1 倍量。滴加试剂一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气,使染液充分混合。
5. 镜检时如果红细胞偏蓝,请放在蒸馏水中1-3 分钟,直至红润为止。
6. 染色过淡,可复染。染色过深,可用水冲洗或浸泡,还可用75%乙醇脱色3-5 秒。
储存:2~8℃,避光,有效期12个月。