本品是适用于常见细胞和组织细胞核染色的染色液。本DAPI染色液为即用型,可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。
DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。 DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。 DAPI的最大激发波长为340nm,最大发射波长为488nm;DAPI和双链DNA结合后,最大激发波长为364nm,最大发射波长为454nm。
操作步骤:
1、对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行DAPI染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的DAPI染色。
2、对于贴壁细胞或组织切片,加入少量DAPI染色液,覆盖住样品即可。对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积3倍的染色液,混匀。
3、室温放置3-5分钟。
4、吸除DAPI染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。
5、直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。
注意事项:
1、本DAPI染色液的浓度经过优化,确保可以满足各种常规染色的需要。
2、荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
3、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4、DAPI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
储存条件:-20℃避光,有效期12个月。