革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。首先，细菌经初染剂结晶紫初染成蓝紫色，再加媒染剂与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
革兰氏阳性细菌（G+）的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，用脱色剂脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。而革兰氏阴性菌（G-）细胞壁类脂含量较多，肽聚糖层较薄且肽聚糖为平面片层结构，易被脱色剂溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经复染液复染为红色。
1. 将涂片在火焰上固定，滴加R1 初染剂染1 分钟，水洗。
2. 滴加R2 媒染剂作用1 分钟后水洗。
3. 滴加R3 脱色剂，此时应将玻片不时摇动，直至无紫色脱落为止，染30 秒钟，水洗，水流不可太大。
4. 滴加R4 复染液染色30 秒，水洗，待干，镜检。
染色结果：革兰氏阳性菌为紫色，革兰氏阴性菌为红色。
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