淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium 1.084,简称LSM-1.084)是一种无菌的即用型分离液,基于Böyum的Ficoll-甲泛影钠溶液做过一些改良,使得操作简单快速且分离效率更高。本品是无菌的聚蔗糖Ficoll/泛影酸钠混合溶液,密度为1.084 g/ml,内毒素含量很低(<0.12 EU/ml),是在严格控制的环境下加工生产的,生产条件符合ISO13485:2003标准和GMP认证。相对于密度为1.077 g/ml的人淋巴细胞分离液,本品适用于分离更高密度的人单个核细胞,包括外周血,脐带血以及骨髓瘤来源的组织样本。还适用于分离大小鼠血细胞,正因为啮齿动物的淋巴细胞密度稍高于人淋巴细胞。
工作原理
去纤维蛋白或抗凝人血以1:1的比例用无菌生理盐水或平衡盐溶液稀释,小心的添加在分离液上层(不要混杂在一起),之后离心30-40min。离心过程中,差速迁移使其最终形成几个不同的细胞分层:
①聚集在管底的颗粒主要是Ficoll 聚集的红细胞以及沉淀物;
②紧挨着上面一层的颗粒主要是粒细胞,其处于LSM-1.084溶液的渗透压临界,具有足够高的密度迁移穿过LSM-1.084溶液层。
③单个核细胞分布在血浆和LSM-1.084分离液的中间层,还包括一些沉降系数低(密度低)的颗粒,如血小板。
淋巴细胞,单核细胞和血小板不具有足够高的密度穿透LSM-1.084分离液层,因此这些细胞在血浆和LSM-1.084分离液层聚集形成一个中间分层。吸取中间层,用平衡盐溶液短暂洗涤,以除去血小板,细胞分离介质和血浆,就可以单个核细胞。通常情况下,分离所得的细胞中95±5%为单个核细胞,细胞存活率>90%,回收率为60±20%。
储存条件:4~8℃,避光