吖啶橙能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA,与双链DNA结合后发出绿色荧光,溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核DNA,发橘红色荧光。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察,可见四种细胞形态:活细胞(VN),核染色质着绿色并呈正常结构;早期凋亡细胞(VA),核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA),核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;非凋亡的死亡细胞(NVN),核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品AO、EB 溶液浓度分别为100ug/ml,所含稳定剂不影响实验效果。
使用方法:(仅供参考)
1、使用前先根据用量,将AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液,现用现配。
2.1、对于贴壁细胞或爬片,去掉培养基,用 PBS 洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞,加入新的 PBS;如果需要观察全部细胞特性,保留未贴壁细胞,可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室温放置 2-5min 后,用 PBS 洗 2 次,除去残余的荧光染料。加入新的 PBS 或培养基于荧光显微镜下观察即可。
2.2、对于悬浮细胞,可直接加入工作液或离心收集细胞后在 PBS 中加入工作液。按照每毫升培养基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室温放置 2-5min 后,离心去除工作液,后用 PBS 洗 2 次,除去残余的荧光染料。加入新的 PBS 或培养基于荧光显微镜下观察即可。
3、建议用蓝光激发,视野下可以观察到死细胞呈现红色,活细胞呈现绿色。
注意事项:
1、含酚红培养基对观察有轻微影响。建议使用无酚红培养基。
2、染色液工作浓度和染色时间可根据具体实验情况适当调整,以期达到最佳效果。
保存:4℃避光密封保存,有效期一年。