本试剂盒适用于测定哺乳动物组织、细胞caspase-3活性。测定原理基于Caspase-3特异水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA),释放硝基苯胺pNA。游离硝基苯胺pNA呈黄色在405nm具有最大吸收峰,用普通可见光分光光度比色方法测定。根据pNA标准管吸光度OD值和标准曲线,计算来自底物肽释放的pNA浓度,得到Caspase-3水解活性。
Caspase-3是凋亡过程中最主要的终末剪切酶,因而也是研究最多的caspase,它激活pro-caspase-2,6,7,9等,特异水解多种凋亡关键蛋白如PARP,介导细胞核染色质固缩、凋亡小体生成、核DNA断裂。
运输及保存:试剂常温运输。到达后按要求储存,1年内稳定。
所需仪器:酶标仪与96孔酶标板;或可见光分光光度计配100μl容积的石英比色杯。
工作波长:最大吸收波长405nm,如不具备也可在400~450nm范围内测定,但灵敏度略降。