检测原理:细胞在发生凋亡时,会在生理生化和细胞形态上发生一系列变化,在凋亡中晚期,激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNA,DNA会被降解成为约180bp-200bp的片段,而正常或者增殖细胞很少发生DNA断裂。利用这个差异,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT酶)把Biotin标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH末端,用POD检测标记并用底物显色,然后进行显微镜观察,这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。
产品优势和特点:TUNEL细胞凋亡检测试剂盒,集成了不同厂家产品的诸多特长,形成独特优势和特点:
★ 采用的重组TdT突变体酶活性更高,该转移酶的比活是其他试剂盒里TdT活力的10倍,同样情况下,不被标记的3’-OH 末端可以顺利标记上Biotin,因此检测灵敏度更高;
★ 试剂盒对标记反应的底物进行了反复优化,采用最佳比例的Biotin-dUTP和未标记的dNTP进行3’ -OH末端的核苷酸掺入,使得同一个断裂的DNA片段末端可以形成更长的“标记尾巴”,该“标记尾巴”一方面减少了相邻掺入dNTP上Biotin-dUTP基团的空间位阻,同时增加了每个断裂片段的Biotin基团数目,从而提高检测灵敏度,同时减少非特异性反应;
★ 非凋亡细胞由于缺乏大量的3’-OH 末端,不会被显著掺入和标记Biotin基团;
★ SA-HRP(POD)是采用定点标记技术,不影响SA(链亲和霉素)与Biotin的结合以及HRP的催化活力;
★ 应用范围广,既可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
检测方法:显微镜
样本类型:石蜡包埋组织切片、组织冰冻切片、细胞涂片以及贴壁细胞
储存条件:试剂盒需储存在-20℃非无霜冰箱中,避免反复冻融。建议分装保存Biotin-标记反应混合物。
保存条件:-20°非无霜冰箱,避免反复冻融。建议分装保存Biotin-标记反应混合物。