CFSE/PI 双染细胞毒性检测试剂盒是利用细胞荧光染料CFSE(CFDA-SE)和PI对细胞进行染色,利用CFSE标记靶细胞,PI标记死的靶细胞来区分不同的细胞,活的靶细胞成绿色,死的靶细胞成红色和绿色,从而检测细胞毒性作用。根据不同的实验方案设计,可以用来检测化合物的细胞毒性作用。也可以用来检测杀伤性T 细胞或NK 细胞介导的细胞毒作用。
CFDA-SE 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。CFDASE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料,可以结合细胞内的蛋白质。CFDASE在结构上将酚羟基部位改造成AM体,所以自身不发荧光,荧光背景低,脂溶性高,能够轻易穿透细胞膜,进入细胞内的CFDASE的AM 部位能被细胞内酯酶水解生成CFSE,通过共价结合赖氨酸侧链的氨基而掺入细胞内和细胞表面的蛋白,且结合后发出强的绿色荧光。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合,固定在细胞内,不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核,在细胞核的荧光最强。
CFSE毒性小,不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单,且不用放射性同位素,不存在安全隐患。可以更快速,更准确和更安全地得到想要的实验数据。
CFSE/PI标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞毒性检测。
CFSE标记细胞呈绿色荧光,荧光波长:λex=496 nm,λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm,此时的发射波长为516nm,使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。PI标记细胞呈红色荧光,流式检测时的激发波长可以选择488nm,此时的发射波长为647nm,使用流式细胞仪检测时可以采用FL2 detection channel。
CFSE标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞毒性外,还可单染后用于细胞增殖检测,或者用荧光酶标板定量活细胞数目,或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。
储存条件:CFSE探针-20℃避光保存;溶解液-20℃保存;PI染色液2-8℃避光保存。
有效期:六个月。