PKH67/PI 双染细胞毒性检测试剂盒是利用细胞荧光染料PKH67和PI对细胞进行染色,利用PKH67标记靶细胞,PI标记死的靶细胞来区分不同的细胞,活的靶细胞成绿色,死的靶细胞成红色和绿色,从而检测细胞毒性作用。
根据不同的实验方案设计,可以用来检测化合物的细胞毒性作用。也可以用来检测杀伤性T 细胞或NK 细胞介导的细胞毒作用。
荧光染料PKH67是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞,通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞。对细胞毒性较小,荧光背景低,脂溶性高,能够轻易穿透细胞膜,有着强而稳定的绿色荧光。经PKH67标记的细胞可用于体外和体内增殖研究,且具有不会使邻近细胞染色的功能。
在细胞分裂增殖过程中,PKH67的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半,根据这一特性,它可被用于检测细胞增殖,细胞周期的估算及细胞分裂等方面。PKH67标记细胞的荧光非常均一,并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中,PKH67标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,荧光强度变为亲代细胞的一半,通过流式细胞仪根据荧光强度的不同,可检测出未分裂细胞,分裂一次(1/2的荧光强度),二次(1/4的荧光强度),三次(1/8的荧光强度),以及更多分裂次数的细胞。PKH67可检测分裂次数多达六次甚至更多。
除了用于细胞增殖检测,PKH67 还可以用于细胞的体外盒体内示踪,标记后荧光在胞内表达稳定,阳性标记率达98%以上,标记细胞形态良好,能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况;或将标记的细胞注入体内,可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。
PKH67标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久,它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH67 毒性较小,不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单,且不用放射性同位素,不存在安全隐患。可以更快速,更准确和更安全地得到想要的实验数据。
PKH67/PI标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞毒性检测。
PKH67标记细胞呈绿色荧光,荧光波长:λex=490 nm,λem=502 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm,此时的发射波长为502nm,使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。PI标记细胞呈红色荧光,流式检测时的激发波长可以选择488nm,此时的发射波长为647nm,使用流式细胞仪检测时可以采用FL2 detection channel。
PKH67标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞毒性外,还可单染后用于细胞增殖检测,或者用荧光酶标板定量活细胞数目,或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。
储存条件:-20℃避光保存。