产品背景:
细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内,巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除,因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应,而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。
AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS 高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得Annexin V 与PS的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。
检测原理:
在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。
Annexin-Ⅴ能与PS 高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。用标记了APC的AnnexinⅤ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞坏死的过程中也会发生细胞膜损伤,坏死的细胞会结合Annexin V-APC。
Annexin V-APC 通常与细胞膜非渗透性核酸荧光染料联合使用以检测凋亡细胞。常用的染料是7-AAD。正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的,核酸染料7-AAD 不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,7-AAD 能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。
7-AAD/Annexin V-APC试剂盒将Annexin Ⅴ与7-AAD匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。坏死细胞可以同时与Annexin V-APC和7-AAD 结合显色,而7-AAD 则被排除在活细胞(APC阴性)和早期凋亡细胞(APC阳性)之外。在没有巨噬细胞的情况下,凋亡的最后阶段会像细胞坏死一样发生整个细胞的解体,从而使凋亡晚期的细胞也同时被APC和7-AAD 结合染色呈现双阳性。
在双变量流式细胞仪的散点图上,左下象限显示活细胞,为(APC-/7AAD-);右上象限是非活细胞,即坏死细胞,为(APC+ /7AAD + );而右下象限为凋亡细胞,显现(APC+/7AAD -)。
Annexin V-APC 细胞凋亡检测试剂盒可以方便快捷的检测凋亡细胞,使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
储存条件:染色液2-8℃避光保存;结合液2-8℃保存;长期不用-20℃保存。
Annexin V-APC染色液避免反复冻融,冻融2次以上可能会失效。长期保存分装后-20℃保存。
有效期:一年。