本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。
CAS号：23491-45-4
分子式：C25H24N6O·3HCl
分子量：533.88
储存条件：-20℃避光，有效期一年
Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
使用方法：
1. 对于固定的细胞或组织：
a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。
b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可;对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
c. 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
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