吖啶橙能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA,与双链DNA结合后发出绿色荧光,溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核DNA,发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强,荧光更为明亮,均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察,可见四种细胞形态:活细胞(VN),核染色质着绿色并呈正常结构;早期凋亡细胞(VA),核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA),核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;非凋亡的死亡细胞(NVN),核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品AO、EB溶液浓度分别为100ug/ml,所含稳定剂不影响实验效果。
使用方法:(仅供参考)
使用前先根据用量,将AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液,先用现配。
对于贴壁细胞或爬片,去掉培养基,用PBS洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞,加入新的PBS;如果需要观察全部细胞特性,保留未贴壁细胞,可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20ul工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。
对于悬浮细胞,可直接加入工作液或离心收集细胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20ul工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。
注意事项:
含酚红培养基对观察有轻微影响。建议使用无酚红培养基。
染色液工作浓度和染色时间可根据具体实验情况适当调整,以期达到最佳效果。
储存条件:4℃避光密封保存,有效期一年