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细胞生物学试剂 > 细胞凋亡与增殖 > 细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)
产品名称:
细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)
型号:
CS-C6227
生产地址
进口、国产
产品价格
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产品简介
细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)价格优惠、质量保证、欢迎咨询订购!
产品详情

一、概述:

中文名称:细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)
英文名称:
产品规格:20T
发货周期:1~3天
保存条件:-20℃冰冻保存。
保存期:一年
工作原理:
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡,其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚,时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,出现单链或双链缺口,并产生与DNA断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将地高辛标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至3’-OH 末端,DIG-dUTP 结合在DNA断点部位,可以通过生物素化抗地高辛抗体(Anti-DIG-Biotin)和 SABC-AP反应后,加入显色底物 BCIP/NBT予以显示。凋亡的细胞核呈紫蓝色,从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容:
1.标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml
2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封闭液(Blocking Reagent)4ml
5.生物素化抗地高辛抗体(×100)20μl
6..SABC-AP(×100)20μl
7.Proteinase K(×200)50μl
8.BCIP/NBT 显色剂(×20)0.2ml
9.抗体稀释液4ml
阳性对照片2张
用户自备试剂:
1.多聚赖氨酸或APES。
2.0.01M TBS(pH7.5)(配法:1L 双蒸馏水中加入8.5克氯化钠,1.2 克Tris和0.45—0.5ml纯乙酸)。
3.0.01M TBS(pH9.0--9.5)(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5克氯化钠,1.2克Tris)。
4.核固红—复染用。
5.水溶性封片剂。
操作步骤:
1.样品处理
(1)玻片预先用多聚赖氨酸或APES进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片:最重要的是及时固定。用 4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)室温下固定 30—60分钟。PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤 2分钟×2次。
(3)组织:应及时固定。常规 4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定 4 小时以上,石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2.标本片加 0.01M TBS(pH7.5)1:200 新鲜稀释 Proteinase K 37℃消化 1—15分钟,TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或仅消化 10—60 秒钟。新鲜石蜡切片消化 5-10分钟。陈旧石蜡切片消化 10-15分钟)。
3.标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer),20μl/片,以保持切片湿润。然后按每张切片取 TdT和 DIG-d-UTP 各1μl,加入18μl标记缓冲液中,混匀,甩去切片上多余液体后加混合的标记液,20μl/片。置样品于湿盒中,37℃标记2 小时。
4.0.01M TBS(pH7.5)洗2分钟×3次。
5.加封闭液 50μl/片,室温 30分钟,甩掉封闭液,不洗。
6.用抗体稀释液 1:100 稀释生物素化抗地高辛抗体:(取1ml抗体稀释液加生物素化抗地高辛抗体 10μl),混匀后 50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中,37℃反应 30-60分钟。0.01M TBS(pH7.5)洗2分钟×3次。
7.用抗体稀释液 1:100 稀释 SABC-AP:取1ml抗体稀释液加 SABC-AP 10μl,混匀后50μl/片加至切片。37℃反应 60分钟。0.01M TBS(pH7.5)洗5分钟×4次。
8.BCIP/NBT 显色:BCIP/NBT(×20)按 1:20的比例用 0.01M TBS(pH9.0-9.5)稀释,混匀。显色液加至标本上。避光显色 20-30分钟,若无背景出现则可继续显色。充分水洗。
9.必要时可用核固红等复染。水溶性封片剂封片,也可简单地用甘油封片。
镜检。
结果判定:
细胞核中有紫蓝色颗粒者为阳性细胞,即凋亡的细胞。
细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP) 细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。

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