保存条件:-20℃冰冻保存一年。
工作原理:
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡,其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚,时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,出现单链或双链缺口,并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将地高辛标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端,DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位,可以通过生物标记的抗地高辛抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后,再结合链酶亲和素-荧光素 FITC(SABC-FITC)。FITC 在 490-495nm 激化,在 520-530nm 发射荧光,呈黄绿色。凋亡的细包核呈黄绿色,从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容:
1.标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml
2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封闭液(Blocking Reagent)4ml
5.生物素化抗地高辛抗体(× 100)20μl
6.SABC-FITC(× 100)20μl
7.Proteinase K(×200)50μl
8.抗体稀释液 4ml
阳性对照片2张
用户自备试剂:
1.多聚赖氨酸或APES。
2.0.01M TBS,PH7.5(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5 克氯化钠,1.2 克 Tris和 0.45—0.5ml 纯乙酸。)
3.DAPI 染色液
4.水溶性封片剂或抗荧光衰减封片剂。