本试剂盒应用范围广,可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。
TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测试剂盒(FITC)可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因组DNA断裂时暴露出的3'-羟基(3'-OH)末端掺入FITC-12-dUTP,从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。
本试剂盒对标记反应进行了优化,采用最佳比例的FITC-12-dUTP和未标记dNTP进行3’-OH末端的核苷酸掺入,使得同一个断裂的DNA片段末端可以形成更长的“标记尾巴”。该“标记尾巴”减少了相邻掺入dNTP上标记基团的空间位阻,增加每个断裂片段上的荧光基团数目,降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭,从而提高检测灵敏度,减少非特异性反应。
试剂盒组份:
5×Equilibration Buffer————750μl
FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
DNase I (1 U/μl)———————5μl
10×DNase I Buffer——————100 μl
注意事项
1)需自备用于洗涤细胞的PBS,用于封片的抗荧光淬灭封片液,用于固定的4%多聚甲醛。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:-20℃,有效期一年。