此试剂盒是用于测定细胞增殖与毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。该试剂盒单溶液试剂包含一种四唑化合物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,内盐;MTS] 和一个电子耦合试剂( 乙硫吩嗪,PES)。PES 的化学稳定性已得到增强,这使它能与MTS 混合形成一个稳定的溶液。
检测时,只需将少量MTS 溶液直接加到检测板孔德培养基中,孵育1-4 小时,然后酶标仪读取490nm的吸光度值就可,省掉了有机溶剂的溶解步骤,简化了实验过程,实验的灵敏度比其它如MTT, XTT 高。
注意事项
1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待检测体系中存在较多的还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。
2. 如果待测溶液有还原性,测定不含细胞,但含有新型细胞增殖及毒性检测溶液在490 nm 处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入此细胞增殖及毒性检测溶液,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的200μl 培养基和10μl 新型细胞增殖及毒性检测溶液进行检测。
3. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡,否则会干扰测定。
4. 为保证您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法1.96 孔板加入细胞100μL/孔(约1×104),置37℃ 5%CO2 细胞培养箱培养24 小时。2.加入适当浓度的受试化合物。3.将96 孔板在37℃,含5% CO2 空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。4.向各孔中加入10μl 的MTS 细胞增殖及毒性检测溶液。5.37℃下孵育1~4 小时。
6. 酶标仪在490nm 波长处检测每孔的光密度。
结果分析
1. 细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加新型细胞增殖及毒性检测溶液,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加新型细胞增殖及毒性检测溶液,无细胞),各重复孔的OD 值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2. 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。