XTT(二甲氧唑黄)是一种类似于MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,活细胞线粒体中存在与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶,可将黄色的XTT 还原成水溶性的橘黄色的甲臜。生成的甲月赞能够溶解在组织培养基中,不形成颗粒,可直接用酶联免疫检测仪检测定吸光值。
注意事项
1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待检测体系中存在较多的还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。
2. 如果待测溶液有还原性,测定不含细胞,但含有XTT 的待测溶液在450 nm 处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入XTT,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的100 μl 培养基和50 μl XTT 工作液进行检测。
3. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡,否则会干扰测定。
4. 为保证您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法
1. 96 孔板加入细胞100μL/孔(约1×104),置37℃ 5%CO2 细胞培养箱培养24 小时。2.加入适当浓度的受试化合物。3.将96 孔板在37℃,含5% CO2 空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4. 向各孔中加入50 μl 的XTT 检测工作液。
5. 37℃下孵育1~4 小时。
6. 酶标仪在450nm 波长处检测每孔的光密度。
结果分析
1. 细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加XTT 工作液,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加XTT 工作液,无细胞),各重复孔的OD 值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2. 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。