细胞坏死和凋亡是两种截然不同的细胞学现象,二者发生的过程在形态学上有很大的区别。在细胞坏死时,细胞膜发生渗漏,细胞内容物包括细胞器以及染色质释放到胞外。而在细胞凋亡过程,起始阶段,染色质固缩、分离并沿核膜分布,细胞质亦发生固缩,但细胞膜依然完整未失去选择透性;在凋亡后期,核染色质断裂为大小不等的片断,与某些细胞器如线粒体一起聚集,为反折的细胞膜所包围,以后逐渐分离,形成凋亡小体。
本产品提供的染料可以分别对正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞的细胞核进行染色。其染色原理为:DyeReagent 1 只进入活细胞,正常的细胞核及处于凋亡早期的细胞核呈现绿色;Dye Reagent 2 只能进入死细胞,将死细胞以及凋亡晚期的细胞核染成橙色。因此通过在荧光显微镜下观察细胞显色和形态的不同,可以同时将正常细胞、坏死细胞、凋亡早期细胞和凋亡晚期细胞区分开来。
注意事项
1. Dye Reagent 1、2 及Mixed Dyes Reagent 有毒,操作时请戴手套;
2. 最好根据需要检测的实际样品数在使用前将两种染料混合,剩余混合染液注意避光保存留待下次使用;
3. 利用血球计数板进行该项操作时,不要用血计板配套的那种质地较硬的盖玻片,而用普通的盖玻片反而更利于结果的观察。
操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡;
2. 用PBS 洗涤细胞二次,并配成浓度为5×105~6×106cells/ml 细胞悬液;
3. 将Dye Reagent 1 和Dye Reagent 2 等体积混合形成Mixed Dyes Reagent(见注意事项2);
4. 吸取25μL 的细胞悬液同1μL 的Mixed Dyes Reagent 轻轻混匀;
5. 吸取上述10μL 的混合液置于一洁净的载玻片,并用盖玻片盖上细胞(见注意事项3);
6. 荧光显微镜510nm 激发波长观察,分别对下列四类细胞进行计数,注意细胞总量须超过200 个。
储存:2-8℃,避光,有效期12个月。
活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB法.荧光显微镜)细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。