在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素PE 标记,以标记了的Annexin V 作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
7-AAD(7-amino-actinomycin D)是一种核酸染料,它不能通过正常质膜,随着细胞凋亡、细胞死亡过程,质膜对7-AAD 的通透性逐渐增加,结合细胞凋亡中DNA 的有控降解,在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光,通过7-AAD 标记DNA 的强弱,将细胞分为三群:7-AAD 强为死亡细胞,7-AAD 弱是凋亡细胞,7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD 同PI 有着相似的荧光特性,但其发射波谱较PI 窄,对其他检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品,可与Annexin V-PE 联合使用。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。
注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
Annexin V-PE/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。