本试剂盒是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞 毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成 橙黄色的formazan(参考下图)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关 系。WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可 以省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳 定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽,灵敏度更高。WST-8和WST-1相比,检测灵敏度更高,更易溶解,并且更加稳定。本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒 性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作 。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于 大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测时间更加灵 活,便于找到最佳测定时间。注意事项:1. 由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于96孔板周围一圈 最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸 发。2. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测,如果待检测体系 中存在较多的还原剂,需设法去除。3. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。